大鼠胆总管插管（胆汁获取实验）实验步骤

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第一步：麻醉大鼠（麻醉剂量和使用浓度及配制方法请百度，麻醉时间至少半小时以上。我们常用的戊巴比妥钠盐类），然后固定大鼠（大鼠固定板）。

 第二步：用消毒酒精棉球消毒需要手术的部位（大鼠胸腔凸出下约1.5-3.5cm处，具体见下图）。

 第三步：剪开找到胆总管的位置，分离出胆总管。用购买的专用插管插进胆总管中（这一步中的插管很重要，软硬合适的插管会使实验很顺利。）

如何找胆总管？在皮肤上开一个小口后，用镊子轻轻打开看到里面上面是肝脏，下面是胃。我们顺着胃十二指肠部位向小肠的方向找，不远处就会看到，一条淡淡接近透明的管道连着肝脏的下部（见下图2）。我们用手术剪根部托起后，发现里面有淡黄色的液体在流动。如果看不到的，可以用棉签轻轻擦拭去除胆总管表面的脂肪后看的更清楚了。具体见下图示：

图1

 图2

图3

找到并分离部分胆总管后，要先结扎远心端（靠近肠的一段），用消毒棉线结扎住。然后靠近结扎处分离出1cm左右的胆总管。然后用眼科剪或大号针头，在靠近结扎处，剪破或穿刺破一个小口（约胆总管的1/2内），然后用购买的专用实验插管（头部请剪成45-60度角）轻轻的插进去，边插边用镊子辅助推进（不可过用力防止胆总管断裂）。具体操作请见视频：https://v.youku.com/v_show/id_XMTgxMDUyMTU3Mg==.html （请微信关注 515788166 ，后期会发布详细的全套视频教程）。

插管插进入不要太深，防止插入肝脏造成出血等（插入约1-1.5cm即可），用灭菌粗棉线固定两三处（不可太用力防止把插管扎扁影响胆汁流出）。固定好后，看看是否有胆汁流出。如果没有胆汁流出轻轻左右滚动一下插管（防止扭结堵住），如果胆汁顺利流出，就顺着插管固定好（千万不要让插管再转动或扭转），缝合后手术部位，消毒后，用无菌纱布盖好手术部位。等所有大鼠手术实验结束后（这时候大鼠全部清醒了），按照一定的角度摆放好，一起给药，开始实验。
 第四步：给药前一定要先确定大鼠胆汁能正常流出（这个实验相对难度较大，为了防止有实验失败的，请多做几只大鼠，择胆汁能正常流出的开展实验）。如果实验开展时间过久，请及时给大鼠补充食物或能量，这个一般可以手动喂食或直接注射葡萄糖营养液。一切方法都不能影响实验客观结果为准，包括麻醉药的选用原则也是。

第五步：实验结束，收集胆汁即可。胆汁一般是分段收集的，时间到了请及时更换接收管，并将收到的胆汁，放入冰箱备测。建议及时检测，不要放冰箱太久。检测前请混匀胆汁，保证浓度均一。
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